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低蛋白条件下燃煤型氟中毒雌鼠全血Cu、Zn、Ga、Mg、Fe水平测定

编辑:娜姐 来源:未知 资料编号:773820130829
资料介绍
目   录
中文摘要 1
英文摘要 1
前言 2
1 材料与方法 2
1.1动物模型的建立; 2
1.2仪器和试剂 2
1.2.1 器材 2
1.2.2 试剂 2
1.3检测指标与方法 2
1.3.1 雌鼠日常情况观察 2
1.3.2 雌鼠体重检测 2
1.3.3 雌鼠氟斑牙的观察 2
1.3.4 雌鼠尿氟、骨氟检测 3
1.3.5 测定微量元素水平 3
1.4数据分析 3
2 结果 3
2.1动物模型复制结果 3
2.1.1 雌鼠日常情况的观察 3
2.1.2 各组雌鼠体重情况 3
2.1.3 氟斑牙发生情况 3
2.1.4 尿氟、骨氟含量变化 4
2.2 Cu、Zn、Ca、Mg、Fe测定结果 4
2.2.1各组雌鼠Cu、Zn、Ca、Mg、Fe水平含量变化 4
3 讨论 5
3 结论 6
参考文献 7
致谢 8






低蛋白条件下燃煤型氟中毒雌鼠全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe水平测定分析
学生:肖友先      导师:郑计梅 原素梅  王飞清
摘要:目的 探讨低蛋白条件下对燃煤型,氟中毒雌鼠在120d时全血铜(Cu)、锌(Zn)、钙(Ca)、镁(Mg)、 铁(Fe)水平的影响。方法 选择40只断乳2周,体重(60-80)克的雌鼠为研究对象,随机分为4组:对照组、低蛋白组、染氟组、染氟伴低蛋白组, 每组10只。120d断尾取血40ul于微量元素稀释液中混匀,用原子吸收光谱法检测Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的水平。结果 低蛋白组、染氟组、染氟伴低蛋白组全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe均较低于对照组;染氟组全血Cu、Zn、Fe明显低于对照组(P<0.05);染氟伴低蛋白组全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe均明显低于对照组(P<0.05),且低于蛋白组全血Zn、Mg、 Fe(P<0.05)。析因分析:氟单独作用时可降低全血Cu、Zn、Ca、Mg、 Fe的含量(F分别为39.365、22.003、9.81、24.926、20.455,P<0.05),单独低蛋白可使Ca、Fe降低(F分别为0.039、11.648,P<0.05),二者对Cu、Zn、Ca、Mg、Fe均不存在交互作用(F分别为0.027、0.200、0.158、2.106、0.099、P>0.05)。结论 高氟可使雌鼠Cu、Zn、Ca、Mg、Fe降低,低蛋白可使雌鼠Ca、Fe降低,低蛋白无拮抗或加强燃煤型氟中毒雌鼠Cu、Zn、Ga、Mg、Fe的作用。
关键词:燃煤型氟中毒;氟中毒;微量元素;低蛋白;鼠
Determination and analysis of blood Cu、Zn、Ca、Mg、 Fe level of female rats poisoning with coal type fluorine under low protein conditions
Student: Xiao Youxian          Mentor: Zheng Jimei   Yuan Sumei   Wang Feiqing
Abstract:Objective To investigate the effect of the levels of copper (Cu), zinc (Zngh), calcium (Ca), magnesium (Mg), iron (Fe) of poisoning blood in 120d under low protein conditions. Methods Choice fourty female rats that Stop breastfeeding for two weeks and have body weight (60-80) g as the research object, randomly divided into 4 groups: control group, low protein group, fluoride group , fluoride with low protein group, with 10 rats in each group, mix 40ul tail blood taked in 120d late to trace element dilution , The levels of Zn, Ca, Mg, Fe and Cu are detected by atomic absorption spectrometry.Results The low protein group, fluoride, fluoride with low protein group was lower than the control group blood Cu、Zn、Ca、Mg、Fe,in blood of fluoride group was significantly lower than the control group (P <0.05);Cu、Zn、Ca、Mg、Fe in fluoride with low protein group was significantly lower than control group blood (P <0.05),while the the group of Zn、Mg、Fe lower than that of low protein group  (P <0.05). Factorial analysis: fluoride alone can reduce blood Cu、Zn、Ca、Mg、Fe (F were 39.365、22.003、9.81、24.926、20.455,P<0.05), low protein alone can make Ca、Fe decreased (F were 0.039、11.648,P<0.05 ),the interaction between the two do not exist for Cu、Zn、Ca、Mg、Fe (F were 0.027、0.200、0.158、2.106、0.099、P>0.05) .Conclusion Female rats Cu、Zn、Ca、Mg、Fe was reduced by fluoride intake,female rats Ca、Fe was reduced low protein , Low protein can not inhibit or strengthen the effect that coal-burning type coal-burning type fluorine can have on the blood level of Cu、 Zn、 Ca、Mg、 Fe in female rats.
Key words:Coal type fluorosis; Fluorosis; Trace elements; low protein; Rats


前言
燃煤型氟中毒是我国特有的一种氟中毒类型,贵州省是全国燃煤污染型氟中毒流行最严重的省份[1]。文献报道[2]:营养不良特别是蛋白质、热量和钙缺乏可加重氟中毒的流行和病情程度。贵州氟中毒病区中摄入蛋白质严重不足,其病区儿童全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe含量下降[3],但低蛋白是否对氟中毒育龄期女性也有此影响未见相关报道。本文以贵州省织金县氟中毒重病区人们饮食为实验基础,建立低蛋白条件下燃煤型氟中毒雌鼠模型,观察全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的水平变化,为蛋白摄入不足地区氟中毒育龄期女性的防治研究提供理论基础。
1 材料与方法
1.1动物模型的建立;
选用贵阳医学院动物实验中心提供的40只断乳2周,体重(60~80)克的SD雌鼠为研究对象,适应性喂养一周后,随机分为4组:对照组、低蛋白组、染氟组、低蛋白伴氟中毒组,每组10只。非染氟组(对照组、低蛋白组)饲料来自于非病区(含氟量为5.2mg/kg,蛋白含量分别为18%、9%);染氟组(染氟组、低蛋白伴氟中毒组)饲料来自于燃煤型氟中毒病区(含氟量为96mg/kg,蛋白含量分别为18%、9%)。自由饮食,每周调整鼠笼位置,力求各组动物实验条件保持一致。
1.2仪器和试剂
1.2.1 器材
组织剪、一次性微量吸管、吸头、电子称、PXJ-1B型氟离子电极(江苏汇分电分析仪器有限公司)、北京博晖创新光电技术股份有限公司BH5500S微量元素仪。
1.2.2 试剂
苦味酸、微量元素稀释液(北京博晖创新光电技术股份有限公司生产的原装试剂盒)75%酒精、配套质控品。
1.3检测指标与方法
1.3.1 雌鼠日常情况观察
每天观察雌鼠的毛色、精神状态。
1.3.2 雌鼠体重检测
于120 d时,用电子秤测定各组雌鼠体重。
1.3.3 雌鼠氟斑牙的观察
根据大鼠氟斑牙分度标准[4] ,每天观察各组雌鼠牙齿变化情况,每周详细记录氟斑牙发生数并判定大鼠牙齿的损伤程度。

1.3.4 雌鼠尿氟、骨氟检测
饲养120d时,检测尿氟之前用代谢笼收集1次24h尿,根据中华人民共和国卫生行业标准(WS/T 89-2001标准编号),采用氟离子选择电极法测定尿氟的含量,采用高温灰化-氟离子选择电极法测定骨氟含量。
1.3.5 测定微量元素水平
雌鼠于染氟120d断尾取血40ul于微量元素稀释液中混匀,用原子吸收光谱法检测雌鼠全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的水平。
1.4数据分析
数据分析采用SPSS17.0统计学软件进行单因素方差分析,析因方差分析,检验水平为0.05。
2 结果
2.1动物模型复制结果
2.1.1 雌鼠日常情况的观察
对照组雌鼠精神较好,毛色有光泽;低蛋白组精神欠佳,毛色光泽度下降,并随时间延长表现加重;染氟组和染氟伴低蛋白组精神萎靡不振,毛色光泽度下降,并随时间的延长表现加重。
2.1.2 各组雌鼠体重情况
单因素方差分析结果表明,雌鼠低蛋白组、低蛋白伴染氟组体重略低于对照组,染氟组与对照组相近,无统计学意义(P<0.05);析因分析结果表明,低蛋白对雌鼠体重有影响(F = 10.583,P<0.05),氟对雌鼠体重无影响(F =0.635,P均<0.05),低蛋白、氟对雌鼠体重无交互作用(F = 0.329,P>0.05)。统计结果见表1:
表1  各组雌鼠体重的比较(s,单位:g)
组别 饲养天数 鼠数 体重
对照组 120 10 258.5±24.950
低蛋白组 120 10 243.5±14.976
染氟组 120 10 257.2±18.755
低蛋白高氟组 120 10 234.9±9.480
2.1.3 氟斑牙发生情况
对照组、低蛋白组在120d均无氟斑牙出现,而染氟组、染氟伴低蛋白组均出现不同程度的氟斑牙,且染氟伴低蛋白组较染氟组氟斑牙症状更明显。各组雌鼠氟斑牙发生情况见表2:
表2  各组雌鼠氟斑牙发生情况(单位:只)

组别 饲养天数 正常 轻度 中度 重度
对照组 120 10 0 0 0
低蛋白组 120 10 0 0 0
染氟组 120 0 2 6 2
染氟伴低蛋白组 120 0 0 7 3
2.1.4 尿氟、骨氟含量变化
饲养120d,单因素方差分析结果,染氟组和染氟伴低蛋白组尿氟、骨氟含量较对照组均明显升高,有统计学差异(P<0.05);析因分析结果,氟对尿氟有影响(F = 278.937,P<0.05),低蛋白对尿氟有影响(F =27.112,P<0.05),氟和蛋白对尿氟无交互作用( F =1.943,P >0.05);120d,氟对骨氟有影响(F =2167.949, P<0.05),低蛋白对骨氟有影响(F =28.033,P<0.05),尿氟、骨氟含量变化如表3:
表3  各组SD雌鼠尿氟和骨氟含量变化情况(s)
组别 饲养天数 鼠数 尿氟(mg/L) 骨氟(mg/kg)
对照组 120 10 0.724±0.122 20.995±3.545
低蛋白组 120 10 5.541±3.092 110.337±26.533
染氟组 120 10 13.073±1.793ab 143.797±14.632ab
染氟伴低蛋白组 120 10 16.697±2.858ab 162.847±12.740ab
     注:与对照组比较,aP< 0.05; 在同一组内,与60天比较,bP< 0.05。
     以上结果证明本研究已成功建立了低蛋白条件下雌鼠燃煤型氟中毒模型
2.2 Cu、Zn、Ca、Mg、Fe测定结果
2.2.1各组雌鼠Cu、Zn、Ca、Mg、Fe水平含量变化
单因素方差分析结果表明:染氟组、染氟伴低蛋白组Cu低于对照组、蛋白组,有统计学差异(P<0.05);染氟Zn、Fe低于对照组,染氟伴低蛋白组低于对照组、低蛋白组,有统计学差异(P<0.05);染氟伴低蛋白组的Ca、Mg低于对照组,有统计学差异(P<0.05),且染氟伴低蛋白组Mg较低蛋白组降低,有统计学差异(P< 0.05)。
析因分析结果表明:高氟的摄入明显降低全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的含量(F值分别为39.365、22.003、9.81、24.926、20.455,P<0.05),低蛋白的摄入对Ca、Fe有影响(F值分别为0.039、11.648,P<0.05),两者对Cu、Zn、Ca、Mg、Fe不存在的交互作用(F值分别为0.027、0.200、0.158、2.106、0.099,P>0.05)(见表4):
表4  各组雌鼠微量元素水平含量(±s,n=10,单位:umol/L)
组别 Cu Zn Ca Mg Fe

对照组 47.440±4.604 121.858±10.694 2.013±0.783 1.625±
0.167 8.303±0.931
低蛋白组 46.892±3.575 117.356±7.798 1.661±0.288 1.634±0.257 7.386±0.895
染氟组 39.388±4.222ab 108.984±10.011a 1.524±0.192 1.436±0.196 7.113±0.684a
染氟伴低蛋白组 38.403±4.208ab 101.767±9.634ab 1.282±0.189a 1.241±0.129ab 6.351±0.535ab
注:与对照组比较,aP<0.05,;与低蛋白组比较,bp<0.05。
3 讨论
许多文献提到地氟病的多因素时称:“营养不良,包括钙、重体力劳动等均能加重氟中毒;蛋白质的缺乏可以增加机体对氟中毒的易感性”[5~7]。莫非,夏曙华等曾报道过过量的氟会使鼠全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的含量下降[8],本文以低蛋白条件下燃煤型氟中毒雌鼠为模型,观察全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的水平变化。结果显示低蛋白组、染氟组、染氟伴低蛋白组全血Cu均低于对照组,后两组较对照组有显著性的差异。经过析因方差分析,发现过量的氟对Cu有影响,低蛋白对Cu无影响,过量的氟与低蛋白对Cu不存在交互作用,提示低蛋白对燃煤型氟中毒雌鼠的全血Cu无影响,氟对Cu的影响与本实验研究结果相吻合。
    本实验染氟组、染氟伴低蛋白组Zn低于对照组,这与其他学者研究报道燃煤型氟中毒患者血锌含量显著下降相吻合[9]。本实验经析因方差分析,发现过量的氟对锌有影响,低蛋白对锌无影响,二者对锌不存在交互作用。
本实验中低蛋白组、染氟组、染氟伴低蛋白组全血Ca较对照组低,但仅有染氟伴低蛋白组有统计学差异。经析因方差分析发现,过量的氟和低蛋白对Ca均有影响,两者对Ca不存在交互作用。提示氟中毒和低蛋白均可引起Ca含量降低,原因可能是过量的氟可破坏人体的Ca代谢平衡。氟化物对Ca有很强的亲和力,氟与钙结合形成氟化钙,沉积于骨骼和(或)软组织中,致血钙降低[10,11]。
本实验中低蛋白组、染氟组、染氟伴低蛋白组全血Mg较对照组低,但仅有染氟伴低蛋白组有统计学差异。经析因方差分析发现,发现过量的氟对Mg有影响,低蛋白对Mg无影响,两者对Mg不存在交互作用。提示氟单独作用时可引起Mg含量降低,这可能是氟与Mg形成难溶性化合物,与血Mg降低有关[12,13]。但低蛋白对氟中毒全血Mg的毒性无促进作用。
本实验染氟组、染氟伴低蛋白组Fe低于对照组,提示燃煤型氟中毒可使Fe含量降低。可能因为氟骨症时可使铜蓝蛋白活性降低,影响铁的释放,使铁的吸收超过铁的代谢,以致大量堆积于组织中,致使铁水平降低。也可能因为高氟摄入可抑制铁代谢,使铁生产
不足铁含量降低。
3 结论
综上所述,本实验结果发现燃煤型氟中毒可使雌鼠Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的含量明显降低,高氟可使雌鼠Cu、Zn、Ca、Mg、Fe降低,低蛋白可使雌鼠Ca、Fe降低低蛋白无拮抗或加强燃煤型氟中毒雌鼠Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的作用。

参考文献
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[2] 齐全乐.蛋白质摄入量对慢性氟中毒大鼠骨病变的影响形态计量学研究.天津医药[J],1990,18(3):147~149.
[3] 莫非,夏曙华,喻茂等.氟骨症患儿血锌铁钙镁铜磷水平测定[J].中国地方病学杂志.2007,26(02):203~205.
[4] 陈学敏.环境卫生学[M].北京:人民卫生出版社,2004.34~35.
[5] Nian-Feng Lin,Jie Tan,Jian-Min Bian.Geochemical environment and health problems in China [J].Environmental geochemistry and Health,2004.26(1):81~8.
[6] 魏生,英鲁,青杨等.萍青海省从事不同生产活动人群饮茶型氟中毒流行现状探讨[J] .中华地方病学杂志,2014,33(02):164~166.
[7] 张爱军,郝春华.营养与氟中毒[J].中国地方病学防治杂志.2000,15(1).57~59.
[8] 莫非,夏曙华,王世君等.氟铝联合对大鼠全血锌、铁、钙、镁、铜的影[J].中国地方病学杂志,2008,27(05):488~490.
[9] 闫菊,王应雄,王里等.燃煤型氟中毒儿童及成人血锌含量分析[J].重庆医学,2013,4(16):1851~1853.
[10] 张永春,吴小候,罗春丽.STC1及钙磷离子在氟中毒致大鼠肾损伤中的作用[J].重庆医学,2012,41(08):732~734.
[11] 刘继灿,王佳琪,于燕妮.骨桥蛋白在低钙和燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达[J].中国地方病学杂志 .,201029(04):379~383.
[12] 焦永卓,牟李红,王应雄等.全血中化学元素与燃煤污染型氟中毒的关系[J].中国地方病学杂志,2012,31(03):275~278.
[13] Ismail  Hakki,Ersoy  BanuKale,Koroglu Simge et al.Serum copper,zinc,and magnesium levels in patients with chronic fluorosis[J].Biological trace element research ,2011,143(2):619~624.
[14]莫非,渠巍.大豆、硒和螺旋藻对氟铝联合中毒大鼠血红蛋白的影响.中国地方病学杂志,2010,29(4):384~386.


致谢
本研究及学士论文是在山西医科大汾阳学院郑计梅老师,原素梅老师及贵阳医学院王飞清老师的悉心指导下完成的。在论文写作和修改中郑老师,原老师严格地把关,提出了很多详细宝贵的意见,在此我对郑老师,原老师表示由衷地感谢!
本文承蒙王老师的工作,为其论文的一部分,特此致谢并说明。感谢王老师在实验实施和论文写作中给我莫大的帮助。他对实验认真而不失创新的态度令我十分受教,在此期间我受益匪浅,亦师亦友的关系和鼓励让我受益良多。
感谢山西医科大学汾阳学院的各位教授、副教授、讲师及其他诸多老师。在山西医科大学汾阳学院的学习生活中,他们的循循善诱、淳淳教导是我不仅懂得如何学习,更懂得了如何做一个对社会有用人。
衷心感谢我的父母,感激他们的养育之恩和这么多年对我无私的奉献以及默默的支持,养育之恩无以回报,我定会不断奋斗,在学业和事业上更进一步。
感谢大学几年的同窗好友的支持与帮助,大学期间收获的无数美好回忆和结交的良师益友将是我一生最宝贵的财富。
最后再次感谢郑计梅老师、原素梅老师、王飞清老师的辛勤指导及帮助,谢谢!
〖设计来源:www.bar71.com 咨询QQ:125584107〗

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