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CLIA法与ELISA法检测血清CEA的比较

编辑:娜姐 来源:未知 资料编号:773820130829
资料介绍
【摘要】 1
【关键词】  1
1 材料和方法 2
1.1标本来源 2
1.2检测器材 2
1.3检测方法 2
2 结果 2
2.1筛查实验 2
2.2变异系数的检测 3
3 讨论 4
参考文献 5
致  谢 6


化学发光免疫法与酶联免疫吸附法在血清癌胚抗原检测中的对比分析
【摘要】 目的: 比较某实验室酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)与化学发光免疫法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)两种方法的检测效果,了解两种方法的检测特点及两者对癌胚抗原(carcinoembryonic antigen ,CEA)检测结果的影响。方法:随机选择2014年6月~2015年3月期间某院450例体检病人为研究对象,分别采用安图酶标仪与全自动化学发光检测仪测定血清CEA,比较两者筛查试验及对比试验试验结果的差异。结果:ELISA对大批量标本具有良好的筛查作用,能够反映结果是否异常但不能较准确的反映CEA的结果值,而化学发光免疫法检测结果较准确,检测过程中影响因素少。用这两种检测方法相结合的方式去检测CEA对肿瘤的检测具有较高的实用价值。
【关键词】 化学发光免疫法 ; 血清癌胚抗原; 酶联免疫吸附法
Chemiluminescence immunoassay and enzyme-linked immunosorbent method in the analysis of serum carcinoembryonic antigen detection.
[Abstract] Objective: To compare the a laboratory of enzyme linked immunosorbent assay and chemical luminous immune method to detect the effect, to understand the effect of two methods of detecting characteristics and their testing results of carcinoembryonic antigen (CEA). Methods: randomly selected June 2014 to 2015 march during a hospital 90 cases of healthy patient serum samples as the research object, respectively, using Antu enzyme mark instrument and automatic chemical luminescence detection instrument for the determination of serum CEA, both screening tests and experimental results of the differences. Results: enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)of large quantities of samples has a good screening effect, can reflect the abnormal but can not accurately reflect the CEA value, and chemiluminescence immunoassay(CLIA) for the detection of more accurate results and detection process less influencing factors. The combination of these two detection methods to detect CEA has high practical value for tumor detection.
[key] Chemiluminescence immunoassay   serum carcinoembryonic antigen   enzyme-linked immunosorbent assay
 癌胚抗原是一个广谱性的肿瘤标志物,它能向人们反映出许多肿瘤的存在,对大肠癌、乳腺癌和肺癌等的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物,但其特异性不强并且灵敏度不高,对肿瘤早期诊断作用不太明显。CEA表达与结肠癌、直肠癌M期显著相关[1]。因而通过检测血液中CEA的含量,对动态监测跟踪结、直肠癌的病情变化和疗效观察有重要的临床价值。为了进一步了解CLIA和ELISA的特点,我们首先用化学发光免疫法和酶联免疫法对450例标本进行检测,并采用对450份合格血清标本的CEA含量进行对比检测,并对检测结果进行了统计分析和比较,从而进一步了解CLIA法与ELISA法的特点。
1 材料和方法
1.1标本来源
450例血清标本均来自本院门诊病人,年龄均在20~70岁之间。20~40岁150例,40~60岁150例,60~70岁150例。
1.2检测器材
波长为450nm的郑州安图酶标仪  96孔微孔板  安图试剂盒 恒温箱 洗板机  拍板纸  全自动化学发光仪Centaur xp 及其试剂盒 
1.3检测方法
采用安图酶标仪(郑州)进行ELISA法的检测,CEA试剂盒由郑州安图试剂公司提供,ELISA法采用的是双抗体一步夹心法的原理,5个标准品浓度分别为:5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml分别加入五个孔50ul,待测样本加入待测孔50ul,然后向每个孔中加入50ul辣根过氧化酶(HRP)标记的检测抗体,37℃恒温箱温育60分钟。经过洗板拍干后用底物四甲基联苯胺(TMB)显色10分钟,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CEA呈正相关。用安图酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),经仪器自动比色后得结果。采用西门子全自动化学发光仪Centaur xp(德国)进行化学发光法进行检测,其测定方法参照仪器说明书进行。
2 结果
2.1筛查实验
随机抽取450个标本,将其分为五组,每组90个进行检测。在仪器质控在控及状态良好的情况下,其中ELISA法结果:第一组中异常值占6个,第二组2个,第三组4个,第四组1个,第五组3个。而CLIA法的结果是:第一组4个,第二组1个,第三组2个,第四组0个,第五组2个。并且每一组中经CLIA检测为异常结果的标本ELISA中都包括。

两种方法对各组检测异常值的个数和总体检出率
第一组 第二组 第三组 第四组 第五组 检出率(%)
ELISA 6 2 4 1 3 3.56
CLIA 4 1 2 0 2 2.00

此试验可以得出:单独用ELISA法检测能够达到筛查的目的。
2.2变异系数的检测
在五组中每组分别随机抽取2个标本组成一个10个标本的新的研究小组。用ELISA法检测时,同一份标本分成九份分别标号1、2、3、4、5、6、7、8、9,在九份中各取50ul在同一微孔板上加9个孔,另外将已分成的九份标本各取50ul加在九个不同的微孔板中,检测结果如图1;用CLIA测量时,也将同一份标本分9份同时上机测量,另将已分成九份的同一份标本分9次不同时间进行测量,检测结果如图2。


图1 ELISA法中某组某份的检测结果


图2 CLIA法中某组某份标本的检测结果
经计算得出用ELISA法测量时,批内结果均值为4.62,CV值为0.01较稳定,但批间结果均值为4.3,CV值为0.34变化较大。测量结果很容易被其它因素影响。而化学发光法检测结果批内均值为3.85,CV值为0.0067较稳定,批间均值为3.843,CV值为0.011.无论是批内还是批间检测的结果都变化不大,图表中的两个线条几乎重合。
3 讨论
CEA是重要的消化道肿瘤标志物,其中对大肠癌诊断虽无特异性,但对监测大肠癌术后有无复发或转移却最有价值,CEA增高反应在临床症状出现前的4~5个月[2],所以定时做CEA的检查有助于控制消化道肿瘤的恶化。ELISA分析法影响因素多,酶标本身不太稳定,容易受温度、酸碱度等非人为因素变化的影响[3]。每次测定都必须做标准曲线,否则检测结果不稳定,所以不适合单份标本的检测,但在经济和成本上,ELISA法比较价廉,且基本能满足医院临床检验科室和临床要求,所以在一些条件受限的地区和医院因买不起化学发光免疫分析仪,故仍然使用上述方法。有学者研究CEA的化学发光法检测方法表明,化学发光法是采用经典的免疫学原理,具有高度特异性,不受黄疸、脂血、溶血等因素的影响[4]。CEA的化学发光法检测优点是自动化程度高,减少了人为操作误差;方法灵敏度高可获得很低的检测下限值;试剂盒质量好,储存时间长;稳定性好,标准曲线2周~4周校正一次,患者可随到随做,且测试试剂无放射污染[5],能充分满足临床的需要。化学发光免疫法在灵敏度、特异度方面不仅可以与ELISA法相媲美,而且化学发光免疫法的准确性和试剂盒的有效期等均优于ELISA法。近几年来,化学发光免疫分析法发展迅速,目前国外应用较为普遍,我国也有一些较大医院引进并使用了这一分析系统[6]。ELISA检测CEA的敏感性有待提高,CEA检测虽不能作为胃肠癌诊断的指标,但有助于部分胃肠癌患者的疗效观察[7]及预后判断。所以在条件允许的实验室可以将两者结合使用,即用ELISA做筛查试验,再用CLIA法对异常标本进行近一步复查,提高检测的准确度。
根据某些资料显示[8],中国大肠癌居恶性肿瘤死因第五位,而CEA的检测可以对消化道肿瘤的预后观察有重要作用。由于检测方法的不同检测结果也会存在一定的差异[9],所以同一地区不同医院间在不断进行可比性调查的同时也应重视质控的一致互通。另外,长
期吸烟也会影响CEA的检测[10],故CEA对肿瘤的检出仅仅只具有辅助作用,不能作为诊断癌症的唯一标准。ELISA法在操作过程中注意事项较多[11],需对试剂盒的使用注意事项进行掌握,而用CLIA法检测时影响因素相对较少,目前已能逐渐满足临床需要[12]。故选择正确的检测方法对疾病的预后诊断具有重要意义。
参考文献
[1]韩潞,江勇,谭卫林.基础研究[J].实用癌症杂志,2015,01:25-27.
[2]周志球,邓伟均,陈占斌,雷晓东.血清CEA检测对大肠癌术后复发的早期诊断价值[J].大肠肛门病外科杂志,2004,01.
[3]魏东,邓爱文,牟成惠.ICA,RIA和ELISA法测定甲胎蛋白的比较[J].第一军医大学学报,2001,21(6):459-460.      
[4]王自正.现代医学标记免疫学[M].北京:人民军医出版社,2000:17-26.
[5]陶其敏.自动化免疫分析的进展[J].中华医学检验杂志,1996,19(6):329.
[6]孙晓丽,禇建国,陈泮藻,杨航燕,戴雨.不同方法检测肿瘤标志物的研究[J];标记免疫与临床;2001,03.
[7]王恩兰,李涛.癌胚抗原检测的方法学评价及其在胃癌诊断中的意义[J];标记免疫与临床;2005,04.
[8]浙大发现预测大肠癌扩散的标记物[N];保健时报;2010.
[9]施立新,金伟青,刘云庆.四种方法测定CEA结果的评价[J]疾病控制杂志2003,2.
[10]洪波.对吸烟人群血清CEA RIA的临床分析[D]贵州州省安顺市人民医院(561000)
[11]上海裕平生物科技公司.高品质 ELISA试剂盒使用说明书[Z].
[12]梁瑛,热依拉?努尔.化学发光法测定CEA的方法学性能评价[J].中外健康文摘,2013,(36).


致  谢
这次毕业论文能够得以顺利完成,并不是我一个人的功劳,是所有指导过我的老师,帮助过我的同学对我帮助和鼓励的结果,在这里我要向他们表示深深的谢意!在完成论文的这段时间里也让我度过了大学里最后的时光。
在过去的近一年里,感谢我的辅导老师薛翠娥老师,没有您的细心指导就没有这篇论文的顺利完成。您在我论文的选题、格式和后期内容修改中给了我很大帮助,尤其是在后期修改中,您不辞劳苦,亲自给我修改论文中的每一个标点,每一处不足,对我耐心的指导。这种认真负责的态度让我深深的感动。同时在很大程度上也将会影响我以后的工作态度。当然我还要感谢陪伴我大学五年的检验系所有的老师,感谢你们对我大学几年里学习的帮助,使我在很多方面都达到了一个较高的层次。
最后我更要感谢百忙之中听我论文答辩的老师们,感谢你们对我的论文做最后的指导,帮助我顺利完成学习任务,取得毕业证书,谢谢!
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